革兰氏染色步骤（革兰氏染色步骤是什么）

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是： 1、涂片固定。 2、草酸铵结晶紫染1分钟。 3、蒸馏水冲洗。 4、加碘液覆盖涂面染约1分钟。 5、水洗，用吸水纸吸去水分。 6、...，以下是对"革兰氏染色步骤"的详细解答!

文章目录

• 1、革兰氏染色步骤是什么
• 2、革兰染色的实验步骤
• 3、革兰氏染色的步骤和原理
• 4、革兰氏染色法的基本步骤

革兰氏染色步骤是什么

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：

1、涂片固定。

2、草酸铵结晶紫染1分钟。

3、蒸馏水冲洗。

4、加碘液覆盖涂面染约1分钟。

5、水洗，用吸水纸吸去水分。

6、加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。

7、蕃红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗。干燥，镜检。

原理

通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙；

因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

革兰染色的实验步骤

1。 涂片：左手持菌液试管，右手持接种环，用接种环从试管培养液中取一环菌，从酒精灯外焰穿过，于载玻片**涂成薄层（事先在背面做好标记圆圈）即可，或先滴一小滴无菌水于载玻片**，用接种环从斜面上挑出少许，与载玻片上的水滴混合均匀，涂成一薄层。拔或塞试管塞时，应将试管口通过火焰略加***灼，最后将接种环在火焰上***灼灭菌。2。 干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥，但勿靠近火焰。3。 固定：常用高温进行固定。即手持载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次，共约3~4秒。要求玻片温度不超过60℃，以玻片背面触及手背皮肤不觉过烫为宜，放置待冷后染色。4. 染色：（1）初染： 加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗。（2）媒染： 滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。（3）脱色： 将载玻片上的水甩净，并衬以白背景，用95%酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30秒，立即用水冲净酒精。（4）复染： 用番红液染1—2分钟，水洗。5. 镜检： 干燥后，置油镜观察。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的***的革兰氏染色反应为准，过于密集的***，常常呈假阳性。6. 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应

革兰氏染色的步骤和原理

革兰氏染色的步骤和原理如下:

步骤:

1、首先在载玻片上滴一小滴蒸馏水，用灼***过的接种针挑取少量***，置载玻片的水滴中与水混合并涂抹开，注意涂抹要均匀平坦，涂抹后直径约为1 cm的薄层。

2、固定。将载玻片在火焰上方固定。

3、染色。加路哥式碘液大概一滴，作用1 min后用水冲洗，注意流水不要直接往薄层上冲，用过滤纸吸干。

4、脱色。用95%乙醇脱色，一般脱色时间大概为30 s。

5、观察。

干燥后，用油镜镜检观察，并做好记录。

原理：染色后***与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到***的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。

革兰染色在医学上的重要意义:

1、鉴别***：用革兰染色法可将所有***分成革兰阳性菌及革兰阴性菌两大类，便于初步识别***。

2、选择***：临床上可很据病原菌的革兰染色性，选择有效的***用于***。

3、与致病性有关：有些革兰阳性菌能产生外毒素，而革兰阴性菌则主要具有内毒素，两者致病作用不同。

革兰氏染色法的基本步骤

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是： 　　

1）涂片固定。在无菌操作条件下，用接种环挑取少量***于干净的载玻片上涂布均匀，固定。

2）草酸铵结晶紫染1分钟。 　　

3）自来水冲洗，去掉浮色。 　　

4) 用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。 　　

5）用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。 　　

6）用蕃红染液复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。 　　

口诀 1 1 半 半

一分钟 30秒